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    《江苏大学》 2019年
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    IKK2在胃癌增殖和凋亡中的作用与机制研究

    曹会  
    【摘要】:目的:通过检测正常胃黏膜上皮细胞与不同胃癌细胞株中、胃炎组织与胃癌组织中核转录因子κB激酶抑制剂的B亚基(IKBKB/IKKβ/IKK2)表达水平的差异,探究其在胃癌细胞增殖、凋亡等过程中的作用及其作用机制,为胃癌的临床靶向治疗提供新的思路和理论依据。方法:通过免疫组织化学方法(Immunocytochemistry)检测临床标本中胃癌组织区域和胃炎区域IKK2蛋白表达水平的差异;利用qRT-PCR及Western blot技术检测IKK2在不同胃癌细胞系中mRNA和蛋白表达水平的差异,筛选出高低表达细胞株;在Oncomine数据库中查找胃癌患者组织及对应的癌旁组织中IKK2的mRNA水平的表达差异,分析IKK2和胃癌患者的总体生存率和无病生存率之间的关系。采用基因过表达技术构建IKK2过表达质粒(CMV-IKK2)并转染至MGC-803细胞,运用抑制剂SC-514作用于SGC-7901细胞抑制IKK2的表达,以Transwell迁移、平板克隆形成、流式细胞术、CCK-8细胞增殖实验检测IKK2过表达及抑制后对细胞增殖、迁移能力的影响和胃癌细胞凋亡的变化;采用Western blot技术检测ERK、β-Catenin通路的相关蛋白表达水平变化。用SGC-7901细胞进行裸鼠皮下荷瘤实验,7天后腹腔注射IKK2抑制剂SC-514,连续注射14天后处死小鼠并取其皮下肿瘤,测量肿瘤体积,分析IKK2对体内皮下瘤的作用。结果:免疫组织化学结果显示,IKK2在临床标本胃癌组织区域中表达水平显著高于胃炎组织区域;且qRT-PCR结果及Oncomine数据库资料分析结果表明胃癌组织中的IKK2 mRNA表达水平高于正常的胃黏膜上皮细胞;Western blot结果显示IKK2在不同胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞中的蛋白表达情况和mRNA结果一致。此外,开普勒生存曲线分析结果显示高表达IKK2的胃癌患者总体生存率和无病生存率显著低于低表达IKK2的胃癌患者。CCK-8增殖实验、平板克隆形成实验、细胞凋亡实验、Transwell迁移实验结果显示:用IKK2过表达质粒转染MGC-803细胞株后,细胞的增殖能力增强,克隆数量增加;细胞凋亡数量减少,迁移能力增强,细胞增殖相关基因C-myc、PCNA表达水平升高,促进了胃癌细胞的增殖;细胞凋亡相关蛋白Bax、PARP、Cleaved Caspase3、Cleaved Caspase9表达升高,Bcl2表达下调,抑制了胃癌细胞的凋亡;此外,基质金属蛋白酶MMP2、MMP9、Timp1也显著升高,表明其对细胞迁移能力也产生了促进作用。过表达IKK2后,ERK通路、NF-κB通路、β-Catenin通路蛋白表达水平也发生了改变,具体变化为:GSK-3β、P-GSK-3β表达下降,β-Catenin、ERK1/2、P-ERK1/2、P65、P-P65表达水平升高,表明IKK2可能通过以上几条通路调节了细胞的增殖、凋亡、迁移。裸鼠皮下荷瘤实验发现使用抑制剂SC-514腹腔注射小鼠后可显著抑制皮下肿瘤的体积,抑制了肿瘤细胞的生长;增殖和凋亡相关蛋白变化和体外细胞实验一致。免疫组织化学检测肿瘤组织中相关增殖凋亡蛋白结果也表明了抑制剂SC-514抑制了细胞的增殖,减少了细胞的凋亡。结论:IKK2参与胃癌的发生、发展,并且其可能通过激活ERK、β-Catenin通路调节了胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移。IKK2有可能成为胃癌临床诊断的新靶标,为胃癌的靶向治疗提供新的理论支撑。
    【学位授予单位】:江苏大学
    【学位级别】:硕士
    【学位授予年份】:2019
    【分类号】:R735.2

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