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      《湖南农业大学》 2018年
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      检测柑橘黄龙病菌的引物筛选及湖南省黄龙病菌遗传多样性分析

      罗永阳  
      【摘要】:柑橘黄龙病(Candidatus Liberibacter,spp)是柑橘病害中最重要的病害之一,同时也是柑橘病害中重要的检疫性有害生物,病原菌为韧皮部杆菌(Candidatus Liberiba cter spp)。柑橘产业因黄龙病的影响造成每年巨大的经济损失。我国最先发现柑橘黄龙病的地区是广东省,在几年前湖南省还属于柑橘黄龙病发生的偶发区,随着信息和物流更加便捷有毒苗木跨地区的运输,同时随着全球气温的升高扩大了柑橘木虱的活动范围,我省的柑橘黄龙病已经成区域性存在,甚至有向全省蔓延的趋势。为了确定目前湖南省的柑橘黄龙病具体分布情况、最适宜的检测方法、以及不同地方不同寄主的柑橘黄龙病病原菌的差异性。筛选出一对特异性和灵敏度高的引物,对湖南省疑似柑橘黄龙病的样品同时采用常规PCR、巢式PCR和LAMP等不同的方法进行检测,进行灵敏度比较和应用分析,最后通过分析不同地区和不同寄主的柑橘黄龙病病原菌16S rRNA、gyrB和omp基因序列的差异性。最后得到试验结果如下:1、通过常规PCR筛选引物F3/B3、F1/B1、gyr1/gyr2、OI1/OI2和16s3/16s4共5对引物,得到引物F1/B1的灵敏度和应用的准确性最好;通过巢式PCR筛选引物F3/B3、F1/B1和OI1/OI2、16s3/16s4,得到引物F3/B3、F1/B1的灵敏度和应用的准确性高于引物OI1/OI2、16s3/16s4的灵敏度和应用的准确性;最后同时比较常规PCR、巢式PCR和LAMP方法检测144个疑似柑橘黄龙病样品,得到LAMP巢式PCR常规PCR。2、通过分析不同地区和不同寄主的柑橘黄龙病病原菌16S rRNA、gyrB和omp基因序列,得到来源不同寄主的柑橘黄龙病病原菌16S rRNA基因序列的聚类更显著,来源不同地区的柑橘黄龙病病原菌gyrB基因序列的聚类更显著,而柑橘黄龙病病原菌omp基因序列的聚类受地区和寄主同时影响,可以更好的反应我省柑橘黄龙病病原菌的进化水平。3、通过常规PCR检测湖南省37个市县和2个省植保站送的疑似柑橘黄龙病的样品1111份。系统的调查分析,确定柑橘黄龙病分布在永州市和郴州市全境,邵阳市和怀化市南部地区,我省柑橘黄龙病发病的界限为:西起怀化会同县-溆浦县-娄底市新化县-邵阳市邵东县-衡阳市祁东县-常宁市-耒阳市-株洲市攸县-东止于株洲市茶陵县。
      【学位授予单位】:湖南农业大学
      【学位级别】:硕士
      【学位授予年份】:2018
      【分类号】:S436.66

      【参考文献】
      中国期刊全文数据库 前10条
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      【共引文献】
      中国期刊全文数据库 前4条
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      【二级参考文献】
      中国期刊全文数据库 前10条
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      10 孔德英;孙涛;李应国;滕少娜;陆丽华;邓朝晖;;柑桔黄龙病LAMP快速检测方法的建立[J];中国南方果树;2013年01期
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      中国重要报纸全文数据库 前10条
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      4 本报记者 于钊;柑橘黄龙病:找准发病根源综合施策[N];湖南科技报;2019年
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      7 本报记者 余杏;柑橘黄龙病为什么难以攻克?[N];湖南科技报;2019年
      8 记者 王田;农业部支持建设柑橘黄龙病防控阻截带[N];农民日报;2018年
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      中国博士学位论文全文数据库 前7条
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      10 钱文娟;基于核酸扩增技术的柑橘黄龙病检测方法研究[D];浙江大学;2018年
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