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    《湖南农业大学》 2018年
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    柑橘砂皮病菌拮抗菌的筛选及拮抗物质的初步分析

    龙兆雨  
    【摘要】:柑橘砂皮病已经成为柑橘的主要病害,影响柑橘的外观从而导致柑橘价格的下降,每年对农业生产造成重大的经济损失。目前防治柑橘砂皮病仍然以化学防治为主,虽然能够起到一定作用但也带来一系列的问题,如药剂毒性较大、容易对环境造成污染,对人畜的健康造成一定的威胁。随着高毒农药在我国的禁用,以及人们对环境保护意识的不断加强,开发绿色环保、安全的生防菌来防治柑橘砂皮病以及其他的植物病虫害已经成为人们研究的重点目标和方向。本研究采集了湖南省长沙市、湘西自治州等地的土壤,并对土壤中的细菌进行了分离、筛选,获得了一株对柑橘砂皮病菌有较强抑制作用的菌株Y2。通过对其形态、生理生化和分子生物学技术等手段对其进行鉴定,并对其培养基条件及发酵优化进一步提高其抑制效果,并对拮抗菌Y2抑菌活性物质进行了初步研究分析。主要研究和结果如下:1、采用土壤稀释法,从长沙市、湘西自治州等地选取土质较为肥沃、微生物较为丰富的不同类型的土壤的样品中分离得到227株细菌。初筛以柑橘砂皮病菌为靶标病原菌,直接平板对峙法对土壤分离细菌进行筛选,初筛获得4株对柑橘砂皮病菌具有较高抑制活性的细菌菌株。复筛通过5倍与10倍稀释发酵滤液的方法发现,菌株Y2的发酵液对柑橘砂皮病的抑制作用最好最稳定。其发酵滤液经5倍和10倍稀释液处理后,对柑橘砂皮病菌菌丝生长的抑制率分别为69.7%、61.2%。2、通过对菌株Y2的形态学观察、生理生化性状测试、16SrDNA序列系统发育分析等方法,初步认为,菌株Y2为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。3、对拮菌株Y2进行发酵条件优化,通过优化培养基的筛选,确定其氮碳源的配方:可溶性淀粉30g/L、蛋白胨4g/L。再对单因素发酵条件进行筛选,确定对菌株Y2的发酵条件为8%的接种量、36小时的种龄、200r/min的转速、pH值为7.0和5天的发酵时间是其最佳条件。4、通过对菌株Y2的代谢产物进行田间防效,发现菌株Y2的发酵液可以对果园中的柑橘砂皮病起到一定的防治作用。在试验中菌株稀释50倍的发酵液、稀释100倍的发酵菌液对柑橘砂皮病在叶片上的病斑防治效果分别是66.9%、60.5%。经过高倍数稀释,发酵液对柑橘砂皮病仍有一定防治效果,说明菌株Y2能有效抑制病原菌,也具备了一定的实际应用价值。
    【学位授予单位】:湖南农业大学
    【学位级别】:硕士
    【学位授予年份】:2018
    【分类号】:S436.66;S476

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